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羟自由基清除能力试剂盒

产品编号:4188201
产品类别:其他试剂盒
纯度规格:微板法
包装规格:96样
市场价:询价
优惠价:立即咨询

Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应,H2O2的量和 Fenton反应产生的 OH·量成正比,Fenton反应生成的羟自由基与水杨酸反应,生成物在 510nm处有特殊吸收。采用固定反应时间法,根据测试物在 510nm处吸光度值的大小来判断测试物清除羟自由基的能力。

试剂盒的组分与配制:

试剂名称

规格

保存要求


试剂一

液体 10mL×1瓶

4℃保存


试剂二

粉体×1瓶

4℃保存

临用前甩几下使试剂落入底部,再加 12mL无水乙醇,充分溶解备用。

试剂三

液体×1支

4℃保存

临用前甩几下或离心使试剂落入底部,取 60μL至新的容器中,再加 6mL蒸馏水溶解备用。

所需的仪器和用品:

酶标仪、96孔板、天平、水浴锅、离心机、研钵、可调式移液器、冰、蒸馏水。

羟自由基清除能力测定:

建议正式实验前选取 2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!

1、样本制备:

①组织样本:

称取 0.1g样本(若是干样可取 0.02-0.05g),加入 1mL的 80%乙醇(自备)进行匀浆,匀浆后转入 2mL离心管中;于 50℃,200-300W条件下超声提取 10min(间隔 5min振荡混匀一次)。12000rpm,离心 10min,取上清,置冰上待测。

②液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。

2、上机检测:

①酶标仪预热 30min,调节波长至 510nm。

②不同样本清除能力不一,可先选取 2个样本做检测,若 A测定-A对照接近零,需对样本进行稀释(用提取液稀释即可)后再检测,或降低样本加样量(如减至 20μL,蒸馏水相应增加)。

③在 EP管中依次加入:

试剂名称(μL)

测定管

对照

空白(仅做一次)

试剂一

50

50

50

试剂二

50

50

50

样本

50

50


蒸馏水

200

250

250

试剂三

50


50

混匀,37℃反应 20min(准确时间),取 200μL转移至 96孔板内,立即于 510nm处读取各管吸光值 A。

结果计算:

羟自由基清除率(%)=[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白×100%

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