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细胞培养知识|细胞换液几种方式
2023.09.04   点击344次

培养细胞的过程中,换液是一项常规的操作,通过换液清除掉细胞在生长过程中产生的代谢废物,补充新鲜的含血清培养基,使细胞能够正常生长。

换液前工作准备

环境准备:相对密封、防尘、防菌的无菌室

操作者准备:双手清洁呈可操作状态

物品准备:超净工作台、CO2培养箱、装有75%医用消毒酒精的酒精喷壶、PBS缓冲液、含血清培养基、巴氏吸管、移液器、废液缸。

工作准备:预热完全培养基,酒精棉擦拭培养基瓶外表面后移入生物安全柜或超净工作台。

细胞培养箱中取出的细胞,酒精棉擦拭培养瓶或皿外表面,移入生物安全柜或超净工作台。待生物安全柜中的循环风将试剂瓶和培养瓶的外表面吹拂几分钟后,拧开培养基瓶盖虚掩,拧开培养瓶瓶盖虚掩,培养皿盖不用拧。

方式一、细胞全换液

如果是贴壁细胞,可以用全量换液法,直接吸去全部旧培养基,补充足量新鲜完全培养基。

具体步骤:

1、将器材放入超净台,打开紫外照射灭菌,若是培养的细胞对温度比较敏感,可以将含血清的培养基瓶放入37℃的水浴箱使得培养基温度在37℃,再转移到超净台紫外灭菌。另外,细胞培养间也需要紫外照射半小时左右。

2、从培养箱取出细胞培养瓶,用酒精喷壶在瓶子表面喷洒75%酒精消毒,转移到超净台,打开盖子,轻轻吸出旧的培养液,可用移液器加入新鲜含血清培养基,注意一定不要从细胞贴壁面加入培养基,应从侧壁加,动作轻柔,以免冲落细胞。

3、加好培养基后,盖上盖子,在瓶子上做标记,注明换液时间,细胞种类,操作人员等信息。

4、放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷瓶子表面,然后应记得整理操作台,用酒精擦拭超净台台面,清理废液和垃圾。

方式二、细胞半换液

如果是悬浮细胞,可以用半量换液法。细胞半换液又称细胞半量换液,即弃掉一半旧的培养基,再加一半新的进去,但该方法会损失一定量的细胞。

半换液原因:

1、给细胞提供适应的缓冲环境;

2、细胞生长过程中可能会分泌某些生长因子,促进生长;

3、节省材料

4、方便操作:比如96孔板,换液很麻烦。所以常采用排枪进行半换液;

5、对于悬浮细胞的培养,有时也会选用半换液减低细胞密度;

操作步骤:

1、吸去一半旧培养基

2、补充新鲜完全培养基。

悬浮细胞如果不想损失细胞,那就需要将培养物转移到离心管中,离心去除旧培养基,再用新培养基重悬细胞沉淀。

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